Preparação de amostras:
Coleta de amostras: Colete amostras como sangue, tecido, saliva e urina de acordo com o objetivo do experimento.
Extração de DNA: use um kit de extração de DNA dedicado para extrair DNA da amostra.
Preparação da reação de PCR:
Primers de design: projete pares de iniciadores específicos com base na sequência de destino para amplificação do DNA do modelo.
Prepare a mistura de reação: incluindo DNA de modelo, iniciadores, tampão, polimerase de DNA, dntps (desoxinucleosídeo trifosfatos), mg 2+, etc.
Defina o programa de PCR:
Configurações do instrumento de PCR: Entre nos parâmetros predefinidos do ciclo de PCR, como temperatura de pré -aquecimento de 95 graus, temperatura de desnaturação (como 95 graus), temperatura de recozimento (como 55 graus), temperatura de extensão (como 72 graus) e número de ciclos.
Reação de PCR:
Adicione amostra: adicione a mistura de reação ao tanque de reação ou chip de PCR, e cada amostra geralmente tem uma reação bem.
Execute PCR: os ciclos de instrumento de PCR de acordo com o programa predefinido, incluindo etapas de aquecimento, resfriamento, recozimento e extensão.
Análise de produto:
Resfriamento após a amplificação: Após a conclusão da PCR, a amostra é resfriada brevemente em 4 graus.
Separação eletroforética: use a tecnologia de eletroforese em gel, como eletroforese em gel de agarose, para separar produtos de PCR de diferentes comprimentos.
Voltização de fluorescência: Os iniciadores marcados com fluorescência emitem a luz de um comprimento de onda específico no produto amplificado, e o instrumento de PCR lê esses sinais e os registra.
Processamento e interpretação de dados:
Software de análise de dados: use o software especializado para analisar o sinal fluorescente e calcular a concentração ou a concentração relativa do fragmento alvo.
Interpretação do resultado: Com base na curva de PCR e na linha de base, determine se a PCR é bem -sucedida, se o fragmento de destino existe e quanto é.
Resultado Gravação e Preservação:
Registre os resultados no relatório experimental e preserve adequadamente os dados e amostras originais.